一、前期准备

 

　　设备检查

 

　　在开始实验前，仔细检查所有器械是否完好无损，包括颅骨钻孔器、微注射泵、显微手术器械套装、立体定位仪和温度控制系统等。确认各部件功能正常，避免因设备故障影响实验进程。

 

　　材料准备

 

　　准备好所需的耗材，如注射器、针头、消毒剂、固定适配器等，并确保它们已进行适当的灭菌处理。对于涉及药物注射的实验，提前准备好所需药物并标注清楚剂量和浓度。

 

　　环境控制

 

　　确保实验室环境符合实验要求，特别是温度和湿度的控制。为小动物提供适宜的环境温度，防止应激反应对实验结果的影响。

 

　　二、动物麻醉与固定

 

　　麻醉处理

 

　　根据实验设计选择合适的麻醉药物及剂量，通常采用异氟烷等。确保麻醉深度适中，既能使动物处于稳定状态，又不会过度抑制呼吸和心跳。

 

　　立体定位仪固定

 

　　将麻醉后的大小鼠放置在立体定位仪上，使用耳棒和鼻夹固定头部位置。调整三维坐标系统，使目标脑区位于操作视野中心。

 

　　三、颅骨钻孔

 

　　标记钻孔位置

 

　　使用标记笔在颅骨表面标出预定钻孔位置，参照标准脑图谱确定目标区域坐标。确保标记清晰可见，便于后续操作。

 

　　开孔操作

 

　　使用颅骨钻孔器，在标记点处缓慢钻孔，注意控制力度和速度，避免损伤下方脑组织。同时，利用冷却系统减少热损伤风险。

 

　　四、微注射操作

 

　　注射器准备

 

　　根据实验需求选择合适规格的注射器，并精确量取所需药物或标记物。连接注射器至微注射泵，设定流速参数。

 

　　注射过程

 

　　缓慢推进注射针头进入预定深度，启动微注射泵进行微量注射。密切观察注射过程中的压力变化，确保液体均匀注入目标区域。